生物学论文_GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达

文章摘要:目的 旨在获得GH/tPA双转基因小鼠，并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂（tPA）的表达水平和个体生长发育状况。方法 利用2只tPA单转基因雄性小鼠（P03、P05）与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配，受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠，PCR检测基因整合情况，ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平，监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果 P03系小鼠共获得286枚受精卵，移植受体母鼠后，顺利产仔77只，经PCR检测获得16只t PA单转基因小鼠（7♂，9♀），13只GH/tPA双转基因小鼠（8♂，5♀），双基因整合率为16.9%;P05系小鼠共获得175枚受精卵，移植受体母鼠后，顺利产仔34只，经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠（5♂，7♀），7只GH/tPA双转基因小鼠（3♂，4♀），双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5μg/mL、674μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因（P<0.05）。在小鼠的整个生长周期内，单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异（P>0.05）。结论 本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠，结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平，且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响，这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。

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